聚合酶链反应斑点杂交技术在临床乙型肝炎病*检测中的应用
聚合酶链反应斑点杂交技术在临床乙型肝炎病*检测中的应用
聚合酶链反应斑点杂交技术在临床乙型肝炎病*检测中的应用
中华流行病学杂志 1999年第4期第20卷 论著摘要
作者：孙峥嵘 郑志红 刘桂荣 胥婧 鲁润铭 刘兵 王桂珍
单位：孙峥嵘 郑志红 刘桂荣 胥婧 鲁润铭 110006 沈阳市传染病院中心研究室；刘兵 王桂珍 中国医科大学微生物教研室
利用半抗原地高辛配基(digixigenin)制备非同位素标记探针技术，分别标记乙型肝炎病*全基因探针(DIG-HBVDNA)及乙型肝炎病*PCR产物C区探针〔DIG-HBV(C/preC)〕，经斑点杂交检测血清HBVDNA及血清聚合酶链反应(PCR)产物，与PCR平行检测122份血清标本。实验中以DIG-HBV(C/preC)为探针，即PCR-斑点杂交方法直接标记纯化的HBV PCR产物经斑点杂交实验检测HBVDNA。结果显示，PCR-斑点杂交法与PCR以及地高辛标记乙型肝炎病*全基因探针斑点杂交实验平行检测122份血清标本，阳性标本分别为60份、50份、30份，阳性率分别为49.1%(60/122)、40.98%(50/122)、24.6%(30/122)。实验表明，HBV全基因探针斑点杂交实验的阳性率只有24.6%，明显低于PCR法及PCR-斑点杂交法，且PCR-斑点杂交法用的探针是以纯化的HBVDNA为模板经PCR扩增法制备而成的，而HBV全基因探针制备则需大量提取和纯化质粒，还需经酶切、回收等步骤，方法繁琐，整个过程时间长，工作量大，且敏感性低，暴露了普通斑点杂交的缺点。PCR方法敏感性高，比普通斑点杂交法灵敏度高约104，能检出1fg的DNA，在临床检验和实验中已被广泛应用，尤其是在病*感染的诊断中有很大的发展。实验还证明，PCR-斑点杂交实验使PCR阳性率由常规的40.98%上升到49.1%，且与ELISA方法检测肝炎患者血清的符合率达89.1%。而且，50例PCR法阳性结果中，用PCR-斑点杂交法检出2例非特异结果，在72例PCR阴性结果中，用PCR-斑点杂交法检出12例阳性结果，经交互法χ2检验，χ2＝5.79，P＜0.05，两种方法结果的差异有统计学意义。证明PCR-斑点杂交法比PCR法更敏感更特异。在对病人血清免疫标志物的分析中发现，HBsAg＋的标本有2例，其HBV-DNA检出率为100%，且三种DNA检测方法结果一致。在HBsAg＋和抗-HBc＋的26例标本中，HBV-DNA检出率较高，PCR电泳法为80.76%，PCR-斑点杂交法为92.30%。在HBsAg＋或抗-HBc＋时，HBV-DNA检出率也较高。以上结果均说明病*在体内复制。在7例HBsAg＋和抗-HBe＋的组中，PCR法检出率为85.71%，PCR-斑点杂交法100%，表明血清发生HBeAg＋到抗-HBe＋转换后HBV复制仍维持一段时间。而3例抗-HBs＋、抗-HBe＋的组中，用PCR法未能检出HBVDNA存在，而用PCR-斑点杂交法可检测出2例阳性。表明HBVDNA水平已降低，但仍有少量复制。可见PCR-斑点杂交检测法省时，省力，可提高检测敏感性且特异性强，操作方便，适用于临床及科研推广应用。
(收稿： 修回：)